همسانه سازی و بیان ایمونوتوکسین اونتاک به صورت هیبریدی با دنباله اینتئینی

Authors

سیدعلی موسوی زاده محمدآباد

sa moosavizadeh department of bioscience and biotechnology, mallek ashtar university of technology, tehran, iran.پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر مهدی زین الدینی

m zeinodini department of bioscience and biotechnology, mallek ashtar university of technology, tehran, iran.پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر علیرضا سعیدی نیا

ar saeeidinia department of bioscience and biotechnology, mallek ashtar university of technology, tehran, iran.پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر محمدعلی نصیری خلیلی

ma nasiri khlili department of bioscience and biotechnology, mallek ashtar university of technology, tehran, iran.پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر

abstract

مقدمه: اینتئین ها بخش های درونی در برخی پروتئین های مخمری و یوکاریوت های تک سلولی هستند که می توانند در فرآیند پیرایش پروتئین ها از مابقی پروتئین جدا شوند. بعد از شناسایی مکانیسم عملکرد اینتئین ها، کاربرد این توالی ها در تخلیص تک مرحله ای پروتئین های نوترکیب مورد توجه قرار گرفته و دنباله های خود برشگر اینتئینی مختلفی گسترش یافتند. مزیت روش کاربرد دنباله های اینتئینی برای تخلیص پروتئین ها نسبت به بقیه روش های تخلیص پروتئین، عدم احتیاج به آنزیم های پروتئازی و مراحل حذف پروتئاز می باشد که این روش را از لحاظ اقتصادی حائز اهمیت می کند. در این مطالعه، ژن به رمز درآورنده denileukin diftitox (با نام تجاری اونتاک،ontak) بصورت مولکولی با دنباله اینتئینی تلفیق گردید و میزان بیان آن در پلاسمید ptxb1 مورد بررسی قرار گرفت. روش بررسی: در این مطالعه، بر اساس جایگاه های چندتایی همسانه سازی(mcs) وکتور ptxb1، پرایمرهای مناسب طراحی شدند و پس از تکثیر قطعه کدکننده اونتاک، همسانه سازی با استفاده از آنزیم های ndei و sapi انجام گرفت. این سازه نوترکیب(ptx-idz) به سلول های e.coli سویه er2566 ترانسفورم گردید و بیان اونتاک مورد مطالعه قرار گرفت. نتایج: همسانه سازی توالی اونتاک در تلفیق با دنباله اینتئینی در وکتور بیانی ptxb1 توسط pcr و برش آنزیمی تائید شد. بیان پروتئین نوترکیب با روش sds-page آنالیزو با روش لکه گذاری وسترن تائید گردید. نتیجه گیری: جایگاه آنزیم محدودکننده sapi در محل تلفیق توالی اونتاک با دنباله اینتئینی عدم ورود هیچ اسید آمینه اضافه ای را در پروتئین هدف، تضمین می نماید. همچنین بیان ایمونوتوکسین اونتاک در این سازه نسبت به بیان این پروتئین به صورت تلفیق شده با دنباله هیستیدینی ارزیابی گردید. با توجه به بیان مناسب پروتیئن اونتاک، در مراحل بعدی، تخلیص تک مرحله ای پروتئین دارویی اونتاک انجام خواهد گرفت.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

همسانه‌سازی و بیان ایمونوتوکسین اونتاک به صورت هیبریدی با دنباله اینتئینی

Introduction: Inteins (INT) are internal parts of a number of proteins in yeast and some other unicellular eukaryotes, which can be separated from the immature protein during protein splicing process. After identifying the mechanism of intein action, applications of these sequences are be considered in the single- step purification of recombinant proteins and different intein tags were develope...

full text

مقایسه تأثیر وضعیت طاق باز و دمر بر وضعیت تنفسی نوزادان نارس مبتلا به سندرم دیسترس تنفسی حاد تحت درمان با پروتکل Insure

کچ ی هد پ ی ش مز ی هن ه و فد : ساسا د مردنس رد نامرد ي سفنت سرتس ي ظنت نادازون داح ي سکا لدابت م ي و نژ د ي سکا ي د هدوب نبرک تسا طسوت هک کبس اـه ي ناـمرد ي فلتخم ي هلمجزا لکتورپ INSURE ماجنا م ي دوش ا اذل . ي هعلاطم ن فدهاب اقم ي هس عضو ي ت اه ي ندب ي عضو رب رمد و زاب قاط ي سفنت ت ي هـب لاتـبم سراـن نادازون ردنس د م ي سفنت سرتس ي لکتورپ اب نامرد تحت داح INSURE ماجنا درگ ...

full text

بهینه سازی ترکیب شیمیایی محیط کشت سلولی معین برای تولید ایمونوتوکسین نوترکیب اونتاک

زمینه و اهداف: ایمونوتوکسین یک پروتئین سمی است که به عنوان یک ترکیب نوین برای درمان سرطان پیشنهاد شده است. اونتاک یک ایمونوتوکسین نوترکیب می باشد که از توکسین دیفتری هیبرید شده با اینترلوکین2 تشکیل شده است. در این مطالعه بهینه سازی ترکیب محیط کشت معین بمنظور بیان اونتاک بررسی شده است. مواد و روش کار: در این تحقیق از باکتری سویه BL21(DE3) ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیب PET-IDZ  جهت بیان اونتاک...

full text

همسانه سازی و بیان ایمونوتوکسین نوترکیب با استفاده از توکسین دیفتری و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیت

زمینه و هدف: ایمونوتوکسین یک توکسین هدف مند است که از اتصال دو بخش مجزا (بخش ایمنی و بخش توکسینی) با واسط شیمیایی یا پپتیدی اختصاصی تشکیل می شود. هدف اصلی تحقیق حاضر تولید پروتئین هیبریدی و نوترکیب مشتمل بر توکسین دیفتری و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیتی است. مواد و روش ها: با توجه به ساختار اولین ایمنوتوکسین تجاری نوترکیب (اونتاک، پروتئین هیبریدی شامل توکسین دیفتری و اینترلوکین 2)، ژن به رمزد...

full text

همسانه سازی پیشبر 2A11 گیاه گوجه فرنگی و بررسی بیان موقت با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن

بیان موقت ژن­های بیگانه در بافت­های گیاهی برای آنالیز عملکرد ژن در زمان کوتاه روش کارآمدی می­باشد. این روش سریع، انعطاف‌پذیر، ساده و در بافت­های تمایز یافته قابل اجرا است. پیشبر 2A11 از پیشبرهای ویژه بافت میوه گیاه گوجه­فرنگی است که باعث بیان بالای ژن 2A11 در میوه می­شود. هدف از این تحقیق همسانه­سازی پیشبر 2A11 و بررسی بیان آن است. پس از استخراج DNA ژنومی از گیاه گوجه­فرنگی، پیشبر 2A11 با استفا...

full text

همسانه سازی و بررسی بیان موقت پیشبر pat1 گیاه سیب زمینی با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن

  To achieve the high level of gene expression, promoters are key elements. Patatin promoter has been used as a specific gene expression in potato tubers. Patatin is a group of glycol protein in potato tuber which is code by a multiple family genes. This protein makes up more than 40% of soluble proteins of potato tubers. Class I Promoters mainly responsible for tuber -specific expression patte...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
مجله دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی یزد

جلد ۲۴، شماره ۳، صفحات ۲۳۲-۲۴۰

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023